1. 抗原样品制备

根据不同的样品选择合适的处理方法

2. 磁珠预处理

2.1 充分重悬磁珠.

2.2 取 25-50 μL 蛋白质 A/G 磁珠转移到 1.5 mL EP 管中（用量量可根据需要调整）。

2.3 加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液，充分重悬磁珠。将 EP 管放入磁力架上，磁性分离。弃上清液。重复此步骤 2 次。

3. 抗体与磁珠结合

3.1 使用结合/洗涤缓冲液将抗体稀释至终浓度为 5-50 μg/mL 。

3.2 将稀释好的 400 μL 抗体加入步骤 2 处理好的磁珠中，充分混悬，置于翻转混合仪孵育 (室温，30 mins；4°C，2 hours)。

3.3 磁性分离，收集磁珠，上清液收集于新的 EP 管中，以备后续使用。

3.4 加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液，充分混悬磁珠，磁性分离，弃上清；重复洗涤 4 次。

4. 抗原与抗体-磁珠复合物结合

4.1：加入 400 μL 抗原样品准备的抗原样品，充分混悬，置于翻转混合仪孵育 (室温，30 mins；4°C，2 hours) ，磁性分离，弃上清。

4.2 加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液 充分重悬磁珠，磁性分离，弃上清；重复洗涤 4 次。

5. 抗原洗脱

本说明书提供以下两种抗原洗脱方案，操作者可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。

a. 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。 步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 25-50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀，95°C 加热 5 mins。分离磁珠，收集上清，进行 SDS-PAGE检测。

b. 非变性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能 分析。 步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 25-50 μL 洗脱缓冲液，室温孵育 10 mins；分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，并立即滴入总体积 1/10 体积的中和缓冲液 (0.1 M NaOH)，将洗脱产物 pH 调节至中性，样品用于后期功 能分析。

注: 本步骤洗脱的抗原为抗原-抗体复合物，如操作者需要单独洗脱目标抗原，推荐使用交联剂，并按相关实验说明操作。